随著(zhe)中國藥典和(hé)GMP要求的(de)不斷發展完善，無菌檢查隔離器日益受到國内制藥企業的(de)關注。本文介紹了(le)無菌檢查隔離器的(de)相關法規要求、發展技術背景及設備特點等。
1、無菌檢查隔離器的(de)法規與技術背景
1.1與無菌檢查隔離器相關的(de)法規
中國藥典2010年版附錄XIH無菌檢查法中規定，“無菌檢查應在環境潔淨度10000級下(xià)的(de)局部潔淨度100級的(de)單向流空氣區域内或隔離系統中進行”。而2014年中國藥典對微生物(wù)實驗室的(de)增補征求意見《附錄XVIG藥品微生物(wù)實驗室質量管理(lǐ)指導原則》中說明(míng)，“無菌檢查應在B級背景下(xià)的(de)A級單向流潔淨區域或D級背景下(xià)的(de)隔離器中進行”。但中國藥典2015年版通(tōng)則微生物(wù)内容第3次公開征求意見的(de)通(tōng)知中《1101無菌檢查法》中取消了(le)第2次公開征求意見中對環境要求的(de)明(míng)确說明(míng)。值得(de)注意的(de)是新增加了(le)《9206無菌檢查用(yòng)隔離系統驗證指導原則》，這是中國藥典中首次納入隔離器，其中提到“無菌檢查用(yòng)隔離器安裝環境的(de)潔淨度要求建議不低于我國現行GMP中D級空氣潔淨度要求，安裝隔離器的(de)房(fáng)間應限制無關人(rén)員出入”。由此可(kě)見，隔離器在無菌檢查中的(de)應用(yòng)己成爲趨勢。
以下(xià)是國際主流法規機構對無菌檢查的(de)相關說明(míng)。
（1）美(měi)國藥典（USP)24版無菌檢查-隔離器系統驗證：“用(yòng)于實施藥典所規定無菌檢査的(de)隔離器從1980年代中期就開始使用(yòng)了(le)。……使用(yòng)隔離器的(de)操作者無需穿著(zhe)特殊的(de)潔淨服來操作無菌檢查，标準的(de)實驗室服就足夠了(le)。……無菌檢査隔離器不一定要放置于定級的(de)潔淨室中，重要的(de)是放置隔離器的(de)區域要對非必要人(rén)員的(de)進出限制管理(lǐ)。……房(fáng)間裏無需進行環境監控。……”
（2）國際藥品認證合作組織（PIC/S)PI012-3無菌檢查：
“無菌檢查應該在無菌條件下(xià)進行，無菌檢查的(de)操作環境要求和(hé)無菌藥品的(de)生産環境一緻。”
(3）PIC/SPI014-3用(yòng)于無菌工藝生産和(hé)無菌檢查的(de)隔離器：
“當隔離器用(yòng)于無菌檢查時，沒有正式要求他(tā)們被放置在D級環境。這個環境應當受到控制，例如隻允許受過培訓的(de)員工進入，但不一定需要定級别。”
1.2無菌檢查隔離器的(de)發展與優勢
在隔離器技術用(yòng)于無菌檢查之前，執行無菌檢查的(de)操作和(hé)産生假陽性是關注的(de)重點問題。無菌檢查過程中，假陽性的(de)産生有以下(xià)可(kě)能性：（1)由操作者在無意識的(de)情況下(xià)造成的(de)污染；（2)在容器表面存在的(de)污染；（3)測試環境與設施造成的(de)污染；(4)使用(yòng)受到污染的(de)試劑和(hé)設備，或者取樣的(de)操作産生的(de)污染。
質量控制微生物(wù)實驗室依賴于有效控制的(de)測試環境、适當的(de)産品樣本和(hé)測試試劑，以及操作者的(de)無菌技巧，才能夠保證無菌檢查的(de)成功執行。适當的(de)試劑和(hé)産品樣本可(kě)以通(tōng)過每批次促生長以及産品樣本抗菌性和(hé)抗真菌性測試來進行驗證，但是控制測試的(de)環境和(hé)管理(lǐ)控制操作人(rén)員的(de)行爲則相對困難。随著(zhe)隔離器應用(yòng)于無菌檢查，雖然操作方式上并沒有簡化(huà)，有時甚至操作起來不如傳統方式方便，但是受到更可(kě)控環境的(de)保護，加強了(le)微生物(wù)的(de)控制，并且降低了(le)假陽性的(de)發生，從而提高(gāo)了(le)測試性能。
美(měi)國某藥廠對分(fēn)别在潔淨室及隔離器中進行無菌檢查所産生的(de)假陽性和(hé)經濟損失的(de)比較結果顯示，在潔淨室中進行無菌檢查造成的(de)平均假陽性産生率、未通(tōng)過審查的(de)藥品率及每年的(de)損失分(fēn)别爲0.5%〜1.0%、1%〜2%和(hé)20萬〜50萬美(měi)元；而在隔離器中進行無菌檢查上述情況均可(kě)避免。另外，從使用(yòng)成本角度考慮，在國際制藥工程協會(internationalsocietyforpharmaceuticalengineering,ISPE)的(de)《無菌産品生産設施基礎指南(nán)》中提到，在使用(yòng)隔離器時，運行成本大(dà)約低于傳統潔淨室運行成本的(de)75%，主要是與供熱通(tōng)風與空氣調節(heating,ventilationandairconditioning,HVAC)有關的(de)運行成本；其他(tā)成本，如更衣室、廠房(fáng)設施布局及環境監測方面也(yě)節省了(le)花費。
無菌檢查在B級背景下(xià)的(de)A級設計的(de)實驗室需要設計複雜的(de)更衣區域和(hé)緩沖間（圖1)。而如果使用(yòng)隔離器，最簡單的(de)設計就是1個D級房(fáng)間，帶1個物(wù)料進出口，1個人(rén)員進出口即可(kě)（圖2)。
2、無菌檢查隔離器
2.1無菌檢查隔離器的(de)設計
無菌檢查隔離器一般由1個傳遞窗(chuāng)和(hé)1個操作區主箱體組成，結構使用(yòng)不鏽鋼制成（圖3)。隔離器具有良好的(de)密閉性，運行時内部正壓控制，内部單向流設計。主箱體上配備有手套，用(yòng)以在隔離器中執行無菌檢查操作。主箱體内部設置有無菌檢查專用(yòng)的(de)集菌儀，應當選用(yòng)針對隔離器專門設計的(de)集菌儀，如Millipore的(de)Steritest™EquinoxIsofitPump(圖4)。傳遞窗(chuāng)和(hé)主箱體配備内置式汽化(huà)過氧化(huà)氫滅菌系統，根據工藝需求對隔離器内部或傳遞進入的(de)耗材、樣品和(hé)試劑容器表面進行滅菌。
隔離器可(kě)集成粒子計數器、微生物(wù)采樣器等環境監測設備，通(tōng)過觸摸屏進行操作，根據客戶不同需求提供滅菌數據和(hé)環境監測數據報表的(de)存儲、電子版本輸出或打印等功能。控制系統的(de)設計可(kě)滿足良好自動化(huà)生産實踐指南(nán)（goodautomatedmanufacturingpractice,GAMP)，以及21CFRPart11(美(měi)國FDA聯邦法規21章(zhāng)第11款）對電子記錄和(hé)電子簽名的(de)要求。
2.2汽化(huà)過氧化(huà)氫滅菌
汽化(huà)過氧化(huà)氫滅菌是無菌檢查隔離器中最重要的(de)功能之一，可(kě)使隔離器内部控制在1個生物(wù)負載很低的(de)環境下(xià)。合理(lǐ)的(de)滅菌循環可(kě)以使整個滅菌循環快(kuài)速和(hé)安全。
由内部氣流循環系統将快(kuài)速生成的(de)汽化(huà)過氧化(huà)氫帶入隔離器主箱體和(hé)傳遞窗(chuāng)中，對試劑樣品、耗材外包裝表面進行滅菌。在隔離器完成空載的(de)滅菌性能确認後，需要針對固定的(de)試劑、耗材等物(wù)品的(de)排放方式進行滿載的(de)滅菌循環開發并驗證，圖5爲正在進行滿載測試。合理(lǐ)的(de)物(wù)品排放、恰當的(de)滅菌循環工藝參數能在較短的(de)時間内（視裝載量和(hé)隔離器空間大(dà)小而定，一般爲1.5〜2.5h)達到生物(wù)指示劑下(xià)降6個對數的(de)效果。連續這種滅菌過程具有重演性，隔離器在空載時1次滅菌循環曲線見圖6。
汽化(huà)過氧化(huà)氫滅菌工藝中很重要的(de)一點是通(tōng)風後過氧化(huà)氫的(de)殘留，一般要求通(tōng)風後過氧化(huà)氫濃度小于1mg/L。過多(duō)的(de)殘留可(kě)能會導緻假陰性的(de)産生。
2.3有關工藝耗材、試劑和(hé)工具
圖7所示爲傳統的(de)無菌檢查，操作人(rén)員正用(yòng)注射器在酒精燈的(de)火焰保護下(xià)處理(lǐ)粉針劑樣品。而試劑、培養基等是用(yòng)牛皮紙覆蓋用(yòng)線紮的(de)。這樣的(de)傳統操作方式，以及選用(yòng)的(de)耗材包裝在隔離器中是絕對不推薦的(de)。
操作者應通(tōng)過隔離器的(de)手套對無菌檢查進行操作，在使用(yòng)前後都要對手套的(de)完整性進行檢查。戴隔離器手套進行操作會降低手的(de)靈活性，因此在隔離器中應當不接觸或小心使用(yòng)尖銳物(wù)品，如西林(lín)瓶的(de)鋁蓋、針頭、剪刀(dāo)等，避免這些尖銳物(wù)紮破手套，導緻隔離器的(de)完整性被破壞。
所有傳入隔離器的(de)物(wù)品均須使用(yòng)汽化(huà)過氧化(huà)氫進行表面滅菌，要确保表面滅菌效果的(de)同時，還要考慮過氧化(huà)氫在包裝表面造成的(de)滲透和(hé)吸附問題。包裝材料的(de)滲透可(kě)能會造成一定的(de)工藝影(yǐng)響，例如用(yòng)于環境檢測的(de)培養基，如果過氧化(huà)氫滲透到培養基中，可(kě)能會造成檢測結果的(de)假陰性；而材料吸附會延長過氧化(huà)氫的(de)分(fēn)解，延長滅菌後的(de)通(tōng)風時間。因此需要對選用(yòng)的(de)包裝材料進行一些評估，或者選用(yòng)隔離器專用(yòng)的(de)成品耗材，如MerckMilliporeBD的(de)相關産品。
